GelRed核酸染料(10,000水溶液)特點(diǎn):
● 無毒性:GelRed *的油性和大分子量特點(diǎn)使其不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),艾姆斯氏試驗結(jié)果也表明,該染料的誘變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于EB。
● 靈敏度高:適用于各種大小片段的電泳染色,對核酸遷移的影響小于SYBR Green I。
● 穩(wěn)定性高: 適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠;室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定,耐光性強(qiáng)。
● 信噪比高:樣品熒光信號強(qiáng),背景信號低。
● 操作簡單:與 EB 一樣,在預(yù)制膠和電泳過程中染料不降解;而電泳后染色過程也只需30 分鐘且無需脫色或沖洗 ,即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。
● 適用范圍廣:可選擇電泳前染色(膠染法)或電泳后染色(泡染法);適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
● 與EB有相同的光譜特性,無需改變?yōu)V光片及觀察裝置:標(biāo)準(zhǔn)的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用,使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可,在 300nm紫外光附近可得到*激發(fā)。但是GelRed不能被488 nm氬離子激光器或相似波長的可見光*激發(fā),因此不推薦使用此類激發(fā)裝置的成像系統(tǒng)。對于此類裝置,我們推薦您使用FuShen(Cat# FS0369),它和SYBR Green I的光譜相似,靈敏度相當(dāng),但更加穩(wěn)定。
GelRed使用方法簡介:
1.膠染法(用法同EB)(推薦方法)
(1) 制膠時加入GelRed 核酸染料(例如:每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000× 儲液,以此比例類推)。
(2) 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
注意事項:
● 此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。
● 由于GelRed具有良好的熱穩(wěn)定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
● 如果總是看到條帶彌散或分離不理想,建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。如果染色后問題依舊存在,則說明問題與染料無關(guān),請嘗試:降低瓊脂糖濃度;選用更長的凝膠;延長凝膠時間以保證邊緣清晰;改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。
● 此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠,對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。
2.泡染法
(1) 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
(2) 用H2O將GelRed 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如將15μL GelRed 10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
(3) 將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右,*染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,染色時間通常介于30min到1h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長。
注意事項:
●用泡染法染色時,染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。
●3× GelRed染色液可以大量制備,在室溫下避光保存直至用完。
幾種核酸染料比較:
名稱 | 靈敏度 | 穩(wěn)定性 | 對DNA遷移的影響 | 安全性 | 適用性 |
GelRed | 高 | 高 | 條帶不彎曲,DNA片段不遷移 | ① 是一種*的油性大分子,不易揮發(fā)升華,不易吸入人體,不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi),安全無毒。 | 通用大小片段電泳染色,與EB有相同的光譜特性,無需改變?yōu)V光片及觀察裝置。標(biāo)準(zhǔn)的EB濾光片或SYBR濾光片都適用,使用普通紫外凝膠透射儀觀察即可,在300nm紫外光附近可得到*激發(fā)。 |
② 艾姆斯氏測試結(jié)果表明,GelRed在凝膠染色濃度下*沒有誘變性,因此*沒有致癌毒性。 | |||||
GelGreen | 高 | 高 | 條帶不彎曲,DNA片段不遷移 | ① 是一種*的油性大分子,不易揮發(fā)升華,不易吸入人體,不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi),安全無毒。 | 通用大小片段電泳染色,適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
② 艾姆斯氏測試結(jié)果表明,DuGreen在凝膠染色濃度下*沒有誘變性,因此*沒有致癌毒性。 | |||||
SYBR Green I | 高 | 低 | 染料濃度較高時,條帶容易彎曲,DNA片段遷移的現(xiàn)象明顯 | 屬花箐染料,能透過細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi),但容易生物降解,不會在體內(nèi)殘留,安全無毒。 | 100bp以上電泳染色,適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
EB | 低 | 高 | 條帶不彎曲,DNA片段不遷移 | ① 分子量小,易揮發(fā)升華,易吸入人體,不易生物降解,在體內(nèi)長期殘留。 | 100bp以上電泳染色,背景熒光信號高;使用普通紫外凝膠透射儀觀察。 |
② 艾姆斯氏測試結(jié)果表明,EB容易引起有機(jī)體突變,是一種強(qiáng)誘變劑,具有高致癌性。 | |||||
Goldview | 低 | 高 | 條帶不彎曲,DNA片段不遷移 | ① 主要成分為吖啶橙,是一種煤焦油提取物,具有高毒,致癌,高誘變性。 | 100bp以上電泳染色,背景熒光信號高;適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
② 易揮發(fā)升華,易吸入人體,能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi),不易生物降解,在體內(nèi)長期殘留。 |
特別提醒:
● 如果您使用的是紫外成像儀,請選擇GelRed;如果您使用激光成像儀或希望在可見光下觀測,請選擇 GelGreen。
● 在極少數(shù)情況下,質(zhì)粒經(jīng)某些酶切后的DNA樣品會出現(xiàn)拖尾和分辨率降低,此時建議同時嘗試兩種染色方法以決定哪種方法更加合適。
相關(guān)產(chǎn)品:
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
FS0366-100UL | SYBR Green I (10,000× in DFSO) 核酸凝膠染料 | 100µl |
FS0366-500UL | SYBR Green I (10,000× in DFSO) 核酸凝膠染料 | 500µl |
FS0367-100UL | SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DFSO) 核酸凝膠染料 | 100µl |
FS0368-1ML | Goldview Nucleic Acid Gel Stain (10,000×) 核酸染料(10,000×) | 1ml |
FS0368-5ML | Goldview Nucleic Acid Gel Stain (10,000×) 核酸染料(10,000×) | 5×1ml |
FS0369-500UL | GelRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝膠染料 | 500µl |
FS0369-2500UL | GelRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝膠染料 | 5×500µl |
FS0370-500UL | GelGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝膠染料 | 500µl |