產(chǎn)品信息
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格(元) |
FS1231-100MG | D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素(鉀鹽 ) | 100mg | 1200.00 |
FS1231-500MG | D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素(鉀鹽 ) | 500mg | 3600.00 |
FS1231-1G | D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素(鉀鹽 ) | 1g | 6800.00 |
FS1231-5G | D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素(鉀鹽 ) | 5×1g | 24000.00 |
FS1231-10G | D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素(鉀鹽 ) | 10×1g | 39800.00 |
D-熒光素鉀鹽(熒光探針與細(xì)胞染色)D-熒光素鉀鹽(熒光探針與細(xì)胞染色)
產(chǎn)品描述
D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,D-熒光素(底物)被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞后,導(dǎo)入研究動物如大小鼠體內(nèi),之后注入熒光素,通過生物發(fā)光成像技術(shù)(BLI)來檢測光強(qiáng)度變化,從而實時監(jiān)測ji病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或yao物的zhi療功效等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。
產(chǎn)品應(yīng)用
D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。
常見商業(yè)化類型的差異(熒光素鉀,鈉,游離酸):
目前市場上有三種產(chǎn)品形式,D-熒光素(游離酸),D-熒光素(鈉鹽),和D-熒光素(鉀鹽)。這三種產(chǎn)品主要差別在于溶解特性。
1)D-熒光素(游離酸)在水以及緩沖體系內(nèi)的溶解性都很弱,除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO(50 mg/ml)。
2)D-熒光素(鈉鹽)和D-熒光素(鉀鹽)能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。
3)D-熒光素(鈉鹽)和D-熒光素(鉀鹽)基本上沒有差別,主要是使用習(xí)慣等因素影響。整體來看,鉀鹽的應(yīng)用文獻(xiàn)明顯多于鈉鹽。
產(chǎn)品屬性
CAS :115144-35-9
化學(xué)名:4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt,D-Luciferin firefly, potassium salt
分子式:C11H7N2O3S2K
分子量:318.42 g/mol
純度:>99% (HPLC),分子生物學(xué)級(超純)
外觀:淺黃色至黃色粉末
溶解性:溶于水(60 mg/ml)
使用方法
A.體外生物發(fā)光檢測
1)儲存液制備
用蒸餾水溶解D-熒光素(鉀鹽),配制成15mg/ml的儲存液(100×),混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存,避免反復(fù)凍融。建議使用的工作液濃度為150µg/ml(相當(dāng)于468µM)。
2)熒光素酶反應(yīng)緩沖液制備
配方【1×,參考Yuichi Oba, et al., 2003】:100mM Tris-HCl(pH 7.8),5mM MgCl2,250µM CoA,150µM ATP。具體緩沖液組成可參考其他文獻(xiàn)資料來調(diào)整。按照以上配方制備熒光素酶反應(yīng)緩沖液(2×)。
3)收集細(xì)胞裂解上清(熒光素酶表達(dá))
根據(jù)需要檢測的細(xì)胞類型,選擇合適的裂解液進(jìn)行細(xì)胞裂解,離心收集上清后續(xù)檢測待用。
4)螢火蟲熒光信號檢測
【注①】:螢火蟲熒光信號的檢測方法大體上取決于冷光測定儀(luminometer)類型(是手動型熒光計、單管注射型或者酶標(biāo)板讀數(shù)型熒光計)。根據(jù)特定發(fā)光測定儀,來考慮注射用量和程序設(shè)置。
【注②】:需設(shè)置不含熒光素酶的孔(用作陰性對照),以測定背景熒光。
例:注射式冷光測定儀(injectible luminometer,單樣或微孔板,200µl終體積)
a)吸取100µl熒光素酶反應(yīng)緩沖液(2×)到一干凈的冷光測定儀比色皿或96孔板的各孔(使用全白平底的96孔板);
b)吸取50~98µl裂解上清到皿或孔內(nèi);
c) 如果有需要,用水來補(bǔ)足使得總體積到198µl;
d)設(shè)置程序注射2µl熒光素儲存液(使工作濃度150µg/ml),程序:2~5秒延遲(delay),之后10s測定。
B.活體成像分析
1)用無菌的PBS(w/o Mg2+)或者DPBS(w/o Mg2+)配制D-熒光素(鉀鹽)工作液(15mg/ml),0.2µm濾膜過濾chu菌?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b于-20℃或-80℃凍存,避免反復(fù)凍融。一旦使用,放到4℃解凍,保持冰冷且避光。
2)注射量取決于注射方式,具體如下:
注射方式 | 劑量 |
靜脈注射(25-27 gauge針頭) | 按10µl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液 |
腹腔注射(25-27 gauge針頭) | 按10µl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液 |
肌肉注射(27 gauge針頭) | 50µl,濃度為1-2mg/ml熒光素工作液 |
鼻內(nèi)注射(pipette) | 50µl,濃度為3mg/ml熒光素工作液 |
3)注射入體內(nèi)10-20 min(待光信號達(dá)到zui強(qiáng)穩(wěn)定平臺期),再進(jìn)行成像分析。
注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,從而確定zui高信號檢測時間和信號平臺期。